江蘇省南京市棲霞區和燕路371號 東南大學(xué)國家大學(xué)科技園科創(chuàng )樓A301
ChiRP(Chromatin Isolation by RNA Purification )是一種檢測與RNA綁定的DNA和蛋白相互作用的技術(shù)。該檢測方法通過(guò)設計生物素或鏈霉親和素探針,把目標RNA拉下來(lái)以后,與其共同作用的DNA染色體片段就會(huì )附在到磁珠上,最后通過(guò)qRT-PCR、測序、免疫印跡法和質(zhì)譜分析等確定目的RNA、DNA和蛋白。
檢測特點(diǎn):
(1)、CHIRP實(shí)驗可研究細胞體內互作;
(2)、CHIRP實(shí)驗既同時(shí)可研究RNA、蛋白質(zhì)和DNA形成的復合體之間的互作;也可研究它們之間的兩兩互作;
(3)、利用CHIRP-MS實(shí)驗尋找與目的lncRNA結合的蛋白,可不受lncRNA長(cháng)度的限制;
(4)、利用CHIRP實(shí)驗可研究circRNA與蛋白質(zhì)或DNA之間的互作。
檢測步驟:
(1)、CHIRP-RNA:探針設計與合成→細胞交聯(lián)→細胞裂解、超聲處理→探針雜交→復合物純化→RNA回收與純化→NGS或qRT-PCR檢測;
(2)、CHIRP-DNA:探針設計與合成→細胞交聯(lián)→細胞裂解、超聲處理→探針雜交→復合物純化→DNA回收與純化→NGS或qPCR檢測;
(3)、CHIRP-Protein:探針設計與合成→細胞交聯(lián)→細胞裂解、超聲處理→探針雜交→復合物純化→蛋白分離→質(zhì)譜鑒定。
ChIRP檢測標準分組:
(1)、IP組:目標lncRNA/circRNA Odd組和Even組(即實(shí)驗組,用于鑒定lncRNA/circRNA作用基因組位置)
(2)、lacZ組:外參對照組,證明ChIRP探針的特異性;
(3)、Input組:捕獲前分離提取的基因組DNA,作為內參對照組,證明探針特異性;
(4)、Positive組:陽(yáng)性對照組,通過(guò)已知驗證有效的探針,通過(guò)WB檢測已知結合蛋白質(zhì),證明整個(gè)ChIRP實(shí)驗體系的有效性;
(5)、目標lncRNA/circRNA qPCR:證明ChIRP探針對目標lncRNA的正確結合及有效捕獲。